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硅膠色譜柱的使用和儲存說明

更新時間:2023-01-06      點擊次數:2837
硅膠因其優良的機械強度和表面易改性等特征,已成為應用廣泛的色譜柱填料。硅膠柱具有柱效高、選擇性好及分析速度快等特點,因而被廣泛用于分離極性小分子如藥物,而用于糖、肽或蛋白質分離較少。
 
硅膠色譜柱主要是通過硅膠的硅羥基吸附能力進行物質的分離,填充顆粒主要是硅膠,所用溶劑常見的是乙酸乙酯,石油醚,不能使用水,對于極性差別比較大的物質分離效果好。
 
硅膠色譜柱使用方法:
 
1、稱量
200-300目硅膠,稱30-70倍于上樣量;如果極難分,也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右,所以要稱40g硅膠,用燒杯量100ml也可以。
 
2.攪成勻漿
加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系,就用石油醚拌。
 
3.裝柱
將柱底用棉花塞緊,不*海沙,加入約1/3體積石油醚,裝上蓄液球,打開柱下活塞,將勻漿一次傾入蓄液球內。隨著沉降,會有一些硅膠沾在蓄液球內,用石油醚將其沖入柱中。
 
4.壓實
沉降完成后,加入更多的石油醚,用雙聯球或氣泵加壓,直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱,都應進行這一步,可使分離度提高很多,且可以避免過柱時由于柱床產生開裂。
 
5.上樣
干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后,加入一些洗脫劑,再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑,而不會沖壞硅膠表面。
 
6.過柱和收集
柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度并不好,推薦用梯度洗脫。收集的例子:10mg上樣量,1g硅膠H,0.5ml收一餾分;1-2g上樣量,50g硅膠(200-300目),20-50ml收一餾分。
 
7.檢測
要更多地使用專用噴顯劑,如果僅用紫外燈,會損失較多產品,紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1-2個數量級。
 
8.送譜
收集的產品旋干,在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體,可過一小凝膠柱,作為送譜前的最后純化手段??沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。
 
高純硅膠色譜柱的儲存方法:
 
1、避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱。
2、防止緩沖溶液和水溶液流動相產生微生物,做到流動相用多少配多少,或在水流動相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細菌成長或在流動相中加20%的有機改性劑,也可抑制微生物生長,有機改性劑還有助于流動相脫氣。
3、使用緩沖溶液后的產品,應用15~20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機溶劑流動相沖洗色譜柱,后換成有機溶劑儲存。
4、將兩端用堵頭擰好,以免柱床填料干裂。
5、盡可能將色譜柱貯存于*有機溶劑中,避免在緩沖溶液中保存。

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